PRIPRAVA BIOLOŠKO AKTIVNEGA KONJUGATA DEJAVNIKA TUMORSKE NEKROZE ALFASimončič, Marjeta (Avtor) Potočnik, Uroš (Mentor) Novak Štagoj, Mateja (Komentor) dejavnik tumorske nekroze αfolna kislinakonjugacijabiološka aktivnost.Dejavnik tumorske nekroze alfa (TNF-α) je proinflamatorni citokin, saj vzpodbuja sistemsko vnetje, z izrazitim pleiotropnim delovanjem. Opravlja torej več različnih vlog v človeškem telesu, lahko tudi hkrati. Osnovna vloga TNF-α je sodelovanje in uravnavanje imunskega odziva. Prva opisana funkcija TNF-α je bila razgradnja določenih vrst celic, predvsem tumorskih celic. Danes je znano, da TNF-α povzroča nekrozo ali apoptozo celic, povzroča tudi vnetje in zavira tumorogenezo ter razmnoževanje virusov. Prav zaradi delovanja proti malignim celicam in večjim tvorbam ter močno izraženi afiniteti do folne kisline le teh, je bil namen naloge pripraviti biološko aktiven analog dejavnika tumorske nekroze alfa (LK-801) in njegov konjugat s folno kislino ter nadalje smo želeli analog in konjugat delno okarakterizirati z analitskimi metodami in določiti njegovo biološko aktivnost. V prvi fazi smo izvedli izolacijo biološko aktivnega proteina dejavnika tumorske nekroze α iz bakterije Escherichia coli. Gojenje biomase je potekalo v bioreaktorju za razmnoževanje kultur, čiščenje izbranega proteinskega analoga LK-801 smo opravili v kromatografskih kolonah. Izolirani analog smo v nadaljevanju pretvorili v pripadajoč ester s pomočjo estrifikacije z aktivirano folno kislino. Reakcije smo izvajali z različnimi prebitki aktivirane folne kisline, s kontrolnim eksperimentom neaktivirane folne kisline ter s starim (že predhodno pripravljenim) in sveže izoliranim - novim analogom LK-801. Večji izkoristek reakcije konjugacije smo dosegli z novim analogom LK-801, ki je v nižjih prebitkih folne kisline imel tudi zelo dobro bološko aktivnost. Konjugacija s starim analogom je bila precej slabša, kar nas je presenetilo, saj sta imela tako predhodno pripravljeni kot sveže izolirani analog TNF-α zadovoljivo biološko aktivnost. Vsekakor smo uspeli pokazati pot sinteze proteina na folno kislino. Sintezna pot na folno kislino se lahko uporabi za različne proteine, ki so morda boljša alternativa analogu TNF-α. [M. Simončič]20112011-09-16 11:08:47Diplomsko delo20342sl