Optimizacija metode za ocenjevanje antioksidativne aktivnosti z uporabo barvila dcfh-da na celični liniji tltOswald, Barbara (Avtor) Langerholc, Tomaž (Mentor) antioksidativna aktivnostDCFH-DAcelicevitamin CtroloksNa modelni makrofagni človeški celični liniji TLT smo optimizirali celično metodo z uporabo barvila DCFH-DA (2´, 7´-diklorofluorescin-diacetat) za določevanje pro- in antioksidativne aktivnosti modelnih substanc vitamina C in troloksa. Ugotavljali smo najprimernejše število celic na vodnjak, optimalen inkubacijski čas in koncentracijo testnih substanc ter najprimernejši vrstni red nanosa reagentov. Vrednost fluorescence v testu z DCFH-DA je bila linearno odvisna od števila celic na vodnjak, vendar le v odsotnosti oksidanta t-BuOOH. Pri eksperimentih se lahko uporablja širok interval koncentracije celic, saj so vse vrednosti izmerjene fluorescence še vedno bile v območju detekcije inštrumenta. Optimalen inkubacijski čas troloksa je od 1 do 2 uri, vitamina C pa 6 ur ali več. Visoke koncentracije obeh antioksidantov lahko vplivajo na nastalo fluorescenco, če sta prisotna v fazi merjenja. Optimalna vrstna reda nanosa reagentov sta bila testna substanca - DCFH-DA - t-BuOOH in t-BuOOH - testna substanca – DCFH-DA.20162016-12-20 14:36:28Magistrsko delo/naloga64829sl