OPTIMIRANJE IN KINETIČNE ŠTUDIJE ENCIMSKO KATALIZIRANE HIDROLIZE LAKTOZEČokl, Gregor (Avtor) Goršek, Andreja (Mentor) Pečar, Darja (Komentor) hidrolizasilikagellaktozabeta-galaktozidazaNamen magistrskega dela je bila raziskava procesa imobilizacije encima galaktozidaze na trdi nosilec, ki je bil v našem primeru silikagel. Študija je bila usmerjena predvsem na presnovo mlečnega sladkorja-laktoze ter vzporedno še na kvantitativno analizo vsebnosti prostih encimov v raztopini, s čimer se je določala stopnja imobilizacije encima. Delo je potekalo v dveh fazah, od katerih je bila prva proces imobilizacije encima in druga reakcija tako pripravljenega nosilca z laktozno puferno raztopino. Pred samim procesom imobilizacije je bilo potrebno pripraviti ustrezni pufer. Izbrali smo fosfatni pufer (K2HPO4/KH2PO4) z različnimi koncentracijami in pH, ki smo mu dodali določeno količino laktoze. Med procesom imobilizacije je bilo najprej pomembno čiščenje silikagela ter šele nato nanos APTES-a, glutaraldehida in encima. Reakcija je potekala v čaši (šaržni proces) pri konstantni temperaturi (40 oC) v dveh zaporednih serijah po 2 uri. Vzorce smo odvzemali na vsakih 15 minut, ki smo jih kuhali, da smo denaturirali encim. Vzorce za določitev prostih proteinov smo jemali le na koncu vsake serije. Po reakciji je sledila analiza vzorcev s spektometrom. Določili smo absorbanco, iz katere smo s pomočjo predhodno narejene umeritvene krivulje, tako za proteinske kot glukozne teste, izračunali ustrezne koncentracije. Iz rezultatov je razvidno, da je maksimalna presnova pri pH = 7,0, kar je v skladu z objavljenimi študijami. Proteinski testi pa so pokazali nižjo vsebnost encima v raztopini pri nižjem pH, kar se prav tako sklada z literaturnimi podatki.[G. Čokl]20142014-11-07 11:18:42Magistrsko delo/naloga46788UDK: 66.094.941:661.183.7:637.345(043.2)COBISS_ID: 18402582NUK URN: URN:SI:UM:DK:DSX5CXXNsl