Razvoj in validacija HPLC metode z uporabo pristopa »Analytical Quality by Design« (AqbD)Pavlovič, Marko (Avtor) Novak, Zoran (Mentor) Perva, Amra (Komentor) Razvoj metodeAQbDKlorheksidin diglukonatLabSolutions MDMagistrsko delo se osredotoča na razvoj in validacijo HPLC metode za določanje sorodnih substanc v raztopini klorheksidin diglukonata z uporabo pristopa Analytical Quality by Design (AQbD). Izhodišče raziskave je bila uradna metoda Evropske farmakopeje, ki uporablja kolono Luna C18 (25 cm × 4,6 mm, 5 μm) in gradientno ločbo s trifluoroocetno kislino v vodi in acetonitrilu. Metoda se je v praksi izkazala za neustrezno, saj ni zagotovila zadovoljive ločljivosti med nečistotama B in N ter O in I. Poleg tega kaže občutljivost na serijske razlike kolon, z sorazmerno dolgim časom kromatografije. Kot nadaljnji korak smo preučili revidirano različico metode, ki temelji na koloni Kinetex C18 (5 μm) in spremenjenem gradientu. Ta je izboljšala ločitev kritičnih parov nečistot, vendar podaljšala že sicer predolg čas analize. Za optimmizacijo revidirane metode smo uporabili programsko opremo LabSolutions MD (Shimadzu), ki temelji na načelih AQbD. Z načrtovanjem eksperimentov (DoE) in simulacijami kromatogramov smo sistematično analizirali vpliv pretoka in temperature kolone na ločljivost. S pomočjo orodij programa kot sta: analiza variance ANOVA ter matematična analiza modela, smo lahko časovno učinkovito in kvalitetno interpretirali rezultate eksperimentov. Podatke smo statistično obdelali ter opredelili robustno območje metode. Rezultati so pokazali, da kombinacija izbranih pogojev (pretok 1,5 mL/min, temperatura 25 °C) omogoča več 30-odstotno skrajšanje časa kromatografije glede na revidirano metodo, ob ohranjeni ustrezni ločljivosti vseh vrhov. Delna validacija je potrdila ponovljivost sistema in metode, linearno odzivnost, specifičnost ter robustnost. Magistrsko delo potrjuje, da kombinacija AQbD pristopa z uporabo programske opreme LabSolutions MD predstavlja zanesljivo in učinkovito orodje za razvoj HPLC metod.[M. Pavlović]20252025-08-19 21:13:03Magistrsko delo/naloga94508UDK: 543.544.5:547.562(043.2)COBISS_ID: 288694787sl