Imobilizacija MenD encima na mezoporozno silikoKovačič, Jure (Avtor) Pečar, Darja (Mentor) Sudar, Martina (Komentor) encimimobilizacijamezoporozna silikaStetterjeva reakcijaV tej študiji smo se osredotočili na imobilizacijo 2-sukcinil-5-enolpiruvil-6-hidroksi-3-cikloheksen-1-karboksilata sintaze (MenD) na mezoporozno siliko SBA-15. MenD katalizira prvi odločilni korak pri biosintezi menakinona (vitamina K2) in zaradi svoje sposobnosti izvedbe encimsko katalizirane Stetterjeve reakcije predstavlja obetaven biokatalizator za organsko sintezo. Encim smo imobilizirali na mezoporozno siliko SBA-15, ki je bila izbrana kot nosilec zaradi svoje velike površine, dobro urejene strukture por in možnosti vgradnje funkcionalnih skupin na njeno površino. Te lastnosti spodbujajo učinkovito imobilizacijo encima, zagotavljajo boljši dostop substrata do aktivnega mesta in zmanjšujejo izpiranje encima iz nosilca. Sintetizirani mezoporozni nosilec SBA-15 smo karakterizirali s pomočjo vrstičnega elektronskega mikroskopa (SEM) za določitev morfologije delcev. Za določitev specifične površine, volumna por in porazdelitve velikosti por smo uporabili analizo po Brunauerju–Emmettu–Tellerju (BET), medtem ko smo za potrditev prisotnosti značilnih funkcionalnih skupin po funkcionalizaciji površine uporabili infrardečo spektroskopijo s Fourierovo transformacijo (FTIR). Učinkovitost imobilizacije smo ocenili z uporabo Bradfordovega testa za določanje beljakovin. Vzorce reakcijskega medija, reakcije s prostim ali imobiliziranim encimom, smo analizirali s tekočinsko kromatografijo visoke ločljivosti (HPLC). Merili smo porabo α-ketoglutarne kisline med reakcijo kot funkcijo časa. Iz rezultatov je razvidno, da je bila imobilizacija encima na nosilec delno uspešna. Ugotovili smo, da ima prost encim višjo katalitično učinkovitost v primerjavi z imobiliziranim encimom.20262026-08-17 08:53:36Diplomsko delo/naloga99428sl