20.500.12556/DKUM-17256 OPTIMIZACIJA PARAMETROV ZA SINTEZO ZAMREŽENIH ENCIMSKIH SKUPKOV IZ ENCIMA HOLESTEROL OKSIDAZE OPTIMIZATION OF PARAMETERS FOR SYNTHESIS OF CROSS-LINKED ENZYME CLUSTERS FROM CHOLESTEROL OXIDASE Delo opisuje optimizacijo ključnih parametrov za sintezo katalitično aktivnih zamreženih encimskih skupkov (CLEAs) iz holesterol oksidaze (ChOx, EC 1.1.3.6). Optimizacija reakcijskih parametrov za sintezo CLEAs je obsegala iskanje optimalnega obarjalnega reagenta, optimalne koncentracije mrežnega povezovalca, optimalne koncentracije biokatalizatorja ChOx ter optimalnega koncentracijskega razmerja med holesterol oksidazo in inertnim proteinom albuminom iz kokošjih jajc (Egg albumin, EA). Sinteza zamreženih encimskih skupkov je bila razdeljena na dva ključna dela; na obarjanje topnega oziroma nativnega biokatalizatorja z ustreznim organskim topilom in na zamreženje tako izoborjenega biokatalizatorja s pomočjo mrežnega povezovalca. V našem primeru smo uspešno sintetizirali zamrežene encimske skupke iz holesterol oksidaze. Aktivnost zamreženih encimskih skupkov smo določili z reakcijo oksidacije holesterola. Optimalni reakcijski pogoji sinteze zamreženih encimskih skupkov so bili doseženi pri koncentraciji encima ChOx 2 mg/mL in koncentraciji ogrodnega proteina albumina 2 mg/mL. Ugotovili smo, da je bila aktivnost zamreženih encimskih skupkov iz biokatalizatorja holesterol oksidaze najvišja pri koncentraciji glutaraldehida 1,8 % (v/v) in acetonu kot obarjalnemu reagentu. Končna aktivnost CLEAs iz holesterol oksidaze pri optimalnih reakcijskih pogojih je bila 94 %. The study describes optimization of the key parameters for the synthesis of catalytically-active cross-linked enzyme aggregates (CLEAs), made of cholesterol oxidase (ChOx, EC 1.1.3.6). The optimization of the reaction parameters consists of seeking for the best precipitant, for the optimal concentration of the cross-linker, for the optimal enzyme concentration and for the optimal concentration ratio betwen cholesterol oxidase and inert protein albumin from chicken eggs (Egg albumin, EA). The synthesis of cross-linked enzyme aggregates was divided into two main parts; the precipitation of soluble or native enzyme with a suitable organic solvent and cross-linking of enzyme aggregates with the help of a cross-linker. Cross-linked cholesterol oxidase enzyme aggregates, which activity was determined by the reaction of oxidation of cholesterol who successfully synthesized. Optimal reaction conditions for CLEAs preparation were found at ChOx enzyme concentration of 2 mg/mL and the albumin concentration of 2 mg/mL. The higest activity recovery of CLEAs was obtained at glutaraldehyde concentracion 1,8 % (v/v) and when the acetone as a precipitant of choice was used. The final activity of CLEAs of cholesterol oxidase, achieved at the optimal reaction conditions, was 94 %. zamreženi encimski skupki imobilizacija holesterol oksidaza optimizacija reakcijski parametri cross-linked enzyme aggregates immobilization cholesterol oxidase optimization reaction parameters true true false [N. Smrečnjak] Slovenski jezik Angleški jezik Diplomsko delo 2011-01-12 08:44:50 2011-01-19 12:52:10 2022-04-13 09:20:37 2023-12-22 03:19:33 2011 0 Maribor 0 0000-00-00 NiDoloceno NiDoloceno NiDoloceno 0000-00-00 0000-00-00 0000-00-00 547.914+577.17(043.2) 14932502 URN:SI:UM:DK:KC7AOLKX VS_Smrecnjak_Natasa_2011.pdf VS_Smrecnjak_Natasa_2011.pdf 1 04D920014A7038F8FC0D15266127FFAE 814ce557ee7c4ad959daca65f77078266b1614b2824b34020af7d198df0ebaf0 d86910df-7c04-11eb-bb7a-00155d0001ca 20.500.12556/dkum/39f64a42-c199-41a5-909d-c39020a99bc7 https://dk.um.si/Dokument.php?lang=slv&id=20010 Fakulteta za kemijo in kemijsko tehnologijo 0 0 0