SINTEZA ZAMREŽENIH ENCIMSKIH SKUPKOV IZ ENCIMA AMILAZE

Kac, Andreja

| | SLO | ENG | Piškotki in zasebnost

Večja pisava | Manjša pisava

Prva stran > Izpis gradiva

Izpis gradiva

Naslov:	SINTEZA ZAMREŽENIH ENCIMSKIH SKUPKOV IZ ENCIMA AMILAZE
Avtorji:	ID Kac, Andreja (Avtor) ID Leitgeb, Maja (Mentor) Več o mentorju... ID Primožič, Mateja (Komentor)
Datoteke:	UNI_Kac_Andreja_2009.pdf (17,82 MB) MD5: 765EB78EEED9EAD9D5C0397D51EE9BFC PID: 20.500.12556/dkum/af27642d-ab0c-40b5-b3fe-c66aeb980f22
Jezik:	Slovenski jezik
Vrsta gradiva:	Diplomsko delo
Organizacija:	FKKT - Fakulteta za kemijo in kemijsko tehnologijo
Opis:	Delo opisuje sintezo aktivnih encimskih skupkov ali agregatov iz encima α — amilaze in postopek zamreženja le — teh z glutaraldehidom, z namenom priprave končne oblike stabilnih zamreženih encimskih skupkov ali na kratko CLEAs. V splošni praksi je postopek priprave zamreženih encimskih skupkov razdeljen na dva ključna dela, in sicer, na precipitacijo topnega oziroma nativnega encima s pomočjo ustreznega organskega topila ali nasičene anorganske soli ter na nadaljnjo zamreženje tako izoborjenega encima s pomočjo zamrežitvenega agensa. Iz literature je znano, da je glutaraldehid, kot homobifunkcionalna organska molekula, najbolj pogosto uporabljen zamrežitveni agens, ker je relativno poceni in je njegova uporaba zelo enostavna. Pri postopku denaturacije oziroma obarjanja nativnega encima je potrebno preizkusiti čim več različnih denaturantov, z namenom, da se ugotovi, kateri uporabljeni denaturant ne povzroči ireverzibilne denaturacije encima, oziroma zagotovi, da je po ponovni resuspenziji izoborjenega encima v vodni raztopini aktivnost encima ponovno blizu 100 %. V našem primeru smo uspešno sintetizirali zamrežene encimske skupke iz α — amilaze. Aktivnost CLEAs smo določili z reakcijo hidrolize vodotopnega škroba. Optimalni reakcijski pogoji sinteze zamreženih encimskih skupkov so bili doseženi pri koncentraciji encima α — amilaze Î³α-amilaza = 8 mg/mL in koncentraciji encima albumina (BSA) Î³BSA = 8 mg/mL. Za obarjanje smo uporabili φ = 90 % (v/v) delež različnih topil in φ = 10 % (v/v) delež raztopljenega encima. Obarjalna agensa, metanol in etanol, v katerih je encim obdržal najvišjo aktivnost, sta bila izbrana za naslednji korak — zamreženje. Reakcija zamreženja je potekala t = 3 h pri sobni temperaturi. Ugotovljeno je bilo, da je bila aktivnost zamreženih skupkov iz encima α — amilaze najvišja pri koncentraciji glutaraldehida φ = 1 % (v/v) in metanolu kot obarjalnemu reagentu. Končni videz raztopine zamreženih encimskih agregatov je podoben motni suspenziji, v kateri so jasno vidni skupki encimov značilne sferične oblike in premera okrog 1 µm. Tehnika za sintezo zamreženih encimskih agregatov je zelo enostavna in nasploh zelo obetavna metoda na področju imobilizacij različnih encimov.
Ključne besede:	zamreženi encimski skupki, CLEAs, α – amilaza, mrežni povezovalec, glutaraldehid
Kraj izida:	Maribor
Založnik:	[A. Kac]
Leto izida:	2009
PID:	20.500.12556/DKUM-11161
UDK:	577.15:663.03(043.2)
COBISS.SI-ID:	13325334
NUK URN:	URN:SI:UM:DK:YLUDKQS4
Datum objave v DKUM:	22.12.2009
Število ogledov:	4371
Število prenosov:	310
Metapodatki:
Področja:	KTFMB - FKKT
:	Kopiraj citat

Skupna ocena:	(0 glasov)
Vaša ocena:	Ocenjevanje je dovoljeno samo prijavljenim uporabnikom.
Objavi na:

Postavite miškin kazalec na naslov za izpis povzetka. Klik na naslov izpiše podrobnosti ali sproži prenos.

Sekundarni jezik

Jezik:	Angleški jezik
Naslov:	SYNTHESIS CROSSLINKED ENZYMES AGGREGATES OF ENZYME AMYLASA
Opis:	This work describe synthesis active enzyme aggregates of α – amylase, further cross – linked with glutaraldehyde in order to obtain the final form of stable cross – linked enzyme aggregates or CLEAs. In practise, the procedure to prepare cross – linked enzyme aggregates generally includes two major steps, that involves first the precipitation of the soluble enzyme with a suitable precipitant such as different organic solvents or inorganic salts and second the crosslinking step with an appropriate cross – linker. Generally, glutaraldehyde is the most common used crosslinking agent, since it is inexpensive and easily applicable. The precipitant of choise to make highly stable cross – linked enzyme aggregates is the one which gives the highest, preferably 100 %, activity yield after the re – suspension of the aggregated enzyme under investigation. In the present study, the cross – linked enzyme aggregates of α – amylase were successfully produced. The activity of CLEAs was determined by the reaction hydrolsis of starch soluble in water. The optimal conditions for the synthesis of cross – linked enzymes aggregates were predicted as following: α – amylase concentration γα-amilaza = 8 mg/mL and enzyme bovine serum albumin (BSA) concentration γBSA = 8 mg/mL. The reaction of precipitation was conducted with up to φ = 90 % (v/v) of different precipitants and φ = 10 % (v/v) of dissolved enzyme. The precipitant agents, metanol and etanol, were further selected or optimization of the reaction of crosslinking. Reaction of crosslinking lasted for t = 3 h at room temperature. The highest activity recovery of CLEAs was obtained at glutaraldehyde concentration φ = 1 % (v/v) and methanol as a precipitant of choice. The final suspension of CLEAs obtained is moderately turbid and enzyme particles can be normally observed with an average diameter of 1 m. Moreover, CLEAs, as such, represent a promising and relatively facile technique for the preparation of any immobilized enzyme, respectively.
Ključne besede:	cross – linked enzyme aggregates, CLEAs, α – amylase, cross-linker, glutaraldehyde

Komentarji

Dodaj komentar

Za komentiranje se morate prijaviti.

Komentarji (0)

0 - 0 / 0

Ni komentarjev!

Nazaj