| | SLO | ENG | Piškotki in zasebnost

Večja pisava | Manjša pisava

Izpis gradiva Pomoč

Naslov:OPTIMIZACIJA IN ZANESLJIVOST METODE ANALIZE TALILNE KRIVULJE VISOKE LOČLJIVOSTI ZA GENSKO TIPIZACIJO IZBRANIH DNA POLIMORFIZMOV POVEZANIH S KRONIČNIMI IMUNSKIMI BOLEZNIMI
Avtorji:ID Savić, Tjaša (Avtor)
ID Potočnik, Uroš (Mentor) Več o mentorju... Novo okno
Datoteke:.pdf UNI_Savic_Tjasa_2012.pdf (2,39 MB)
MD5: 301736FF37A9F73F9E29C39CF50CE2E3
PID: 20.500.12556/dkum/fc4c40a1-0c39-4e80-a8cd-c21e709d3563
 
Jezik:Slovenski jezik
Vrsta gradiva:Diplomsko delo/naloga
Tipologija:2.11 - Diplomsko delo
Organizacija:FKKT - Fakulteta za kemijo in kemijsko tehnologijo
Opis:Analiza talilne krivulje visoke ločljivosti (HRM) je postala široko uporabljana metoda za genotipizacijo enonukleotidnih polimorfizmov (SNP), ki že zamenjuje verižno reakcijo s polimerazo v povezavi s polimorfizmom dolžin restrikcijskih fragmentov (PCR-RFLP). Namen tega diplomskega dela je bil optimizirati ter potrditi zanesljivost HRM za genotipizacijo treh izbranih SNPov, povezanih s kroničnima imunskima boleznima revmatoidnim artritisom in astmo. Študija opisuje teoretske osnove preiskovane problematike, uporabljene postopke laboratorijskega dela ter prikazuje analizo rezultatov. Genotipizacija je bila izvedena z referenčno metodo PCR-RFLP in HRM analizo, rezultati po obeh metodah so bili med sabo primerjani. Študija je skupno vključevala 463 DNA vzorcev slovenskih bolnikov oz. zdravih posameznikov (kontrole). Rezultati kažejo, da je bilo pri vseh treh SNPih doseženo visoko ujemanje med metodama (91%-98%). Izračunane frekvence dobljenih genotipov kažejo, da je bilo boljše ujemanje z referenčnimi frekvencami z NCBI pri dveh SNPih doseženo po HRM, kar potrjuje visoko zanesljivost te metode. Pri tem delu se je pojavilo nekaj težav pri optimizaciji PCR in pravilnem določanju genotipov po RFLP, kar še poudarja prednosti analize talilnih krivulj. HRM je zahtevala manj časa za optimizacijo, izvedbo in pridobivanje rezultatov, tako da je bila enostavnejša, posledično cenejša in v določenih primerih še bolj zanesljiva kot tradicionalna PCR-RFLP.
Ključne besede:enonukleotidni polimorfizmi (SNP), genotipizacija, metoda analize talilne krivulje visoke ločljivosti (HRM), verižna reakcija s polimerazo (PCR), polimorfizem dolžin restrikcijskih fragmentov (RFLP), kronične imunske bolezni
Kraj izida:Maribor
Založnik:[T. Savić]
Leto izida:2012
PID:20.500.12556/DKUM-38081 Novo okno
UDK:616.1(043.2)
COBISS.SI-ID:16644118 Novo okno
NUK URN:URN:SI:UM:DK:N5EOCK15
Datum objave v DKUM:19.09.2012
Število ogledov:3928
Število prenosov:467
Metapodatki:XML DC-XML DC-RDF
Področja:KTFMB - FKKT
:
Kopiraj citat
  
Skupna ocena:(0 glasov)
Vaša ocena:Ocenjevanje je dovoljeno samo prijavljenim uporabnikom.
Objavi na:Bookmark and Share



Postavite miškin kazalec na naslov za izpis povzetka. Klik na naslov izpiše podrobnosti ali sproži prenos.

Sekundarni jezik

Jezik:Angleški jezik
Naslov:OPTIMIZATION AND ACCURACY OF HIGH RESOLUTION MELTING ANALYSIS FOR GENOTYPING OF SELECTED DNA POLYMORPHISMS ASSOCIATED WITH CHRONIC IMMUNE DISEASES
Opis:High Resolution Melting (HRM) analysis has become a widely used method for genotyping of single nucleotide polymorphisms (SNPs) replacing PCR-Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) method. The aim of this work was to optimize and confirm the accuracy of HRM for genotyping of selected SNPs associated with two chronic immune diaseases: rheumatoid arthritis and asthma. This study describes the theoretical background of the studied theme, work procedures of both methods used and analyses the results. Genotyping was performed by the reference PCR-RFLP method and HRM analysis and results were compared between the two methods. The study included alltogether 463 DNA samples of Slovene pacients and healthy individuals (controls) . The results show, that a high percentage in genotypes matching between both methods for all three SNPs (91%-98%) was achieved. The calculated genotype frequencies show that for two out of three SNPs a better matching with reference frequencies from NCBI was achieved by using HRM, which confirms the high accuracy of this method. During our experimental work some difficulties with PCR optimization and determination of the right genotype were encountered which accentuated the advantages of HRM analysis. HRM required less time for optimization, preparation and data acquirement, making it a much simpler and cheaper method and in some cases even more reliable and accurate than traditional PCR-RFLP.
Ključne besede:single nucleotide polymorphisms (SNP), genotyping, high resolution melting curve analysis (HRM), polymerase chain reaction (PCR), restriction fragment length polymorphism (RFLP), chronic immune diseases


Komentarji

Dodaj komentar

Za komentiranje se morate prijaviti.

Komentarji (0)
0 - 0 / 0
 
Ni komentarjev!

Nazaj
Logotipi partnerjev Univerza v Mariboru Univerza v Ljubljani Univerza na Primorskem Univerza v Novi Gorici